【摘 要】
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酵母自主复制元件（Autonomously replicating sequence,ARS）是酵母染色体上起始基因组复制过程的功能元件。ARS的复制能力与承载DNA片段之间的相互关系尚不清晰。本研究主要探究不同DNA片段对于ARS复制能力的影响规律,展开如下工作:1、研究酿酒酵母不同ARS的复制效率差异。以I号染色体上的ARSs为例,利用整合不同的ARSs的质粒丢失率表征ARSs的复制效率,结果
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酵母自主复制元件（Autonomously replicating sequence,ARS）是酵母染色体上起始基因组复制过程的功能元件。ARS的复制能力与承载DNA片段之间的相互关系尚不清晰。本研究主要探究不同DNA片段对于ARS复制能力的影响规律,展开如下工作:1、研究酿酒酵母不同ARS的复制效率差异。以I号染色体上的ARSs为例,利用整合不同的ARSs的质粒丢失率表征ARSs的复制效率,结果表明,ARSs复制效率由高到低为:ARS106、ARS104、ARS111、ARS112、ARS102、ARS105、ARS107、ARS109、ARS108、ARS103、ARS110。通过与已报道的强ARSs进行比较研究,ARS106为较强ARS;ARS110为较弱ARS。2、利用强弱不同的ARS和不同长度的高GC含量DNA片段探究了DNA片段对于ARS复制能力的影响。当ARS携带1 kb、5 kb和10 kb等较短片段时,片段越短更利于ARS稳定复制。当ARS携带40 kb、80 kb等较长片段时,片段越长更利于ARS稳定复制。当ARS均携带10 kb片段时,强ARS106携带相同片段时质粒稳定性高于弱ARS110。3、通过添加羟基脲和乙醇的压力条件,研究了环境胁迫对ARS复制能力的影响。在羟基脲的复制胁迫压力下,弱ARS110相比强ARS106受到复制抑制效果更加明显;另外,ARS携带较长的DNA片段时对于复制胁迫压力较不敏感,而携带较短的片段时较为敏感。在乙醇的生长胁迫压力下,ARSs携带较短的片段时对于8%浓度的乙醇生长胁迫压力较为敏感。在长期传代过程中,ARS在较大的环形质粒中稳定复制的能力优于较小的质粒,且强ARS相比弱ARS的稳定传代能力更强。本研究探究ARS的复制能力与承载DNA片段的关系,对于了解DNA复制过程具有重要意义,可为真核微生物染色体设计与合成研究提供支撑。
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