目的:1.验证外周血中是否存在具有间充质干细胞特性的干细胞群,建立稳定可靠的细胞培养方法。2.探讨将外周血源性间充质干细胞（PBMSCs）向施万细胞（SCs）诱导分化的方法,从组织学和功能方面对其进行鉴定。3.验证诱导后的PBMSCs（iPBMSCs）加入到人工神经导管内能否提高神经修复的效果。4.探讨过表达NeuroD1能否诱导PBMSCs向神经元分化,并从分子、细胞水平以及功能方面进行多方面验证。方法:1.使用密度梯度离心法,从大鼠外周血中分离提取单个核细胞层进行培养,通过流式细胞术鉴定间充质干细胞的表面标记——CD29d、CD44、CD90、CD105和CD146,以及造血干细胞特异性表面标记——CD45。将细胞分别向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、施万细胞和神经元进行定向诱导分化并鉴定,验证其多向分化能力。2.将PBMSCs通过三个步骤向SCs定向诱导分化,通过免疫荧光染色、qRT-PCR和Western Blot验证诱导后的PBMSCs（iPBMSCs）是否表达SCs的特异性标记物和功能蛋白。进一步把iPBMSCs移植到夹伤坐骨神经内,在体内验证iPBMSCs的成髓鞘能力。3.把iPBMSCs与SAPNS混合,注入PLGA导管内制成人工神经导管,桥接10mm坐骨神经缺损,从组织学、电生理和运动功能多方面评估坐骨神经修复情况。4.通过逆转录病毒导入NeuroD1基因,使PBMSCs过表达NeuroD1,利用免疫荧光染色和Western Blot检测神经元的特异性标记物——β-tubulin Ⅲ、DCX和NeuN。将NeuroD1过表达PBMSCs与SAPNS混合培养之后移植入脊髓内,观察其在体内的变化情况。结果:1.从外周血中分离培养的贴壁细胞表达间充质干细胞的特异性标记物CD29d、CD44、CD90、CD105和CD146,不表达造血干细胞的特异性标记物CD45,并能够分别定向诱导成为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、施万细胞和神经元。2.向SCs方向定向诱导的PBMSCs表达SCs的特异性标记物S100、CNPase和P75NTR,以及SCs的功能性蛋白NGF、NT-3、c-Fos和Krox20,并且能够参与成髓鞘过程。3.iPBMSCs联合PLGA+SAPNS人工神经导管能够促进神经损伤后轴突再生、再髓鞘化、远端靶器官、神经传导功能和运动功能的恢复。4.过表达NeuroD1使PBMSCs向神经元进行分化,表达神经元的特异性标记物β-tubulin Ⅲ、DCX 和 NeuN。过表达 NeuroD1 的 PBMSCs 与 SAPNS 混合培养后移植入脊髓内,移植细胞能够继续向神经元分化。结论:1.外周血内存在具有间充质干细胞特性的干细胞——外周血源性间充质干细胞（PBMSCs）。2.PBMSCs能够诱导分化成为有功能的SCs,可以作为SCs的新的来源,用于组织工程来修复周围神经缺损。3.iPBMSCs结合PLGA+SAPNS人工神经导管能够有效的促进神经损伤修复,为PBMSCs在神经组织工程的应用研究提供基础,也为神经损伤修复提供新的策略。4.过表达NeuroD1促使PBMSCs分化成为神经元,为神经组织工程提供了新的神经元种子细胞来源。