【摘 要】
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研究背景与目的动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种以脂质代谢紊乱为主要特征的慢性炎症性疾病,主要累及大中型动脉,对人类健康造成了极大危害。尽管AS的发病机制尚未阐明且受多种因素共同影响,但是胆固醇代谢紊乱一直是影响AS发生发展的潜在危险因素。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）通常是指转录本长度大于200个核苷酸且不具备蛋白质编码功能的一类
【基金项目】
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国家自然科学基金（81871701、81572051、81772244、81672076）； 广东省自然科学基金重点项目（2017A030313535、2017A030313532、2018A030313533）； 广州市科技计划（201607010267、201604020015、201707010034、20170701015
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研究背景与目的动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种以脂质代谢紊乱为主要特征的慢性炎症性疾病,主要累及大中型动脉,对人类健康造成了极大危害。尽管AS的发病机制尚未阐明且受多种因素共同影响,但是胆固醇代谢紊乱一直是影响AS发生发展的潜在危险因素。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）通常是指转录本长度大于200个核苷酸且不具备蛋白质编码功能的一类RNA分子,是新近发现的具有多种生物学效应的RNA分子,可从多个层面调控疾病的发生发展过程。有研究表明,lncRNAs在胆固醇代谢过程中起着重要的调控作用,提示lncRNAs极有可能参与AS等心血管疾病的发生发展过程。因此,寻找一个能够调控体内胆固醇平衡的新调控靶点以及探讨lncRNAs在AS发生发展过程中的相关机制具有重要的研究价值。材料与方法首先通过一些生物信息学网站预测靶标lncRNA RP11-463O9.5的蛋白质编码能力;随后通过收集8对人动脉粥样斑块组织和人正常动脉内膜组织,分别采用实时荧光定量 PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和 RNA 荧光原位杂交（RNA fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH）实验探究lncRNARP1 1-463O9.5在组织中的表达差异;体外培养人主动脉血管平滑肌细胞（human aortic vascular smooth muscle cells,HA-VSMCs）,通过qRT-PCR实验探究氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）在不同浓度和不同作用时间对HA-VSMCs中lncRNA RP11-463O9.5的影响;通过尼罗红染色、胞内胆固醇检测试剂盒实验探究lncRNARP11-463O9.5对血管平滑肌细胞中胆固醇代谢的作用;通过RNA-FISH实验探究lncRNA RP11-463O9.5在HA-VSMCs中的亚细胞定位情况;最后通过qRT-PCR、免疫印迹实验和小干扰片段以及重组质粒转染实验探究lncRNA RP11-46309.5对胆固醇代谢相关分子小凹蛋白-1（caveolin-1）的影响以及相关信号通路。结果1.生物信息学网站预测lncRNARP11-463O9.5不具有蛋白质编码的能力。2.qRT-PCR和RNA-FISH结果表明,与人正常动脉内膜组织相比,lncRNA RP11-463O9.5在AS斑块组织中的表达水平显著上调。3.ox-LDL能够浓度/时间依懒性地上调lncRNARP11-463O9.5的表达水平。随着ox-LDL浓度的增大或者培养时间的延长,与对照组相比,lncRNA RP11-463O9.5在处理组中的表达水平逐渐升高,具有统计学差异（p＜0.05）。4.尼罗红染色和胞内胆固醇含量检测结果表明,过表达lncRNA RP11-463O9.5可进一步介导ox-LDL对HA-VSMCs胞内脂滴聚集,增加胞内总胆固醇和游离胆固醇含量。5.RNA-FISH结果表明lncRNA RP11-463O9.5在血管平滑肌细胞中的细胞浆和细胞核中均有表达,但在细胞浆中的表达量相对较高。6.qRT-PCR和WB结果表明,过表达RP11-463O9.5可显著抑制小凹蛋白-1的mRNA和蛋白水平,从而介导ox-LDL调控小凹蛋白-1的表达。7.干扰小凹蛋白-1表达可促进HA-VSMCs胞内胆固醇蓄积,而过表达小凹蛋白-1可部分抑制lncRNA RP11-463O9.5对HA-VSMCs胞内胆固醇的蓄积作用。结论LncRNA PP11-46309.5在AS斑块组织中高表达可能与ox-LDL的刺激有关,从而可促进HA-VSMCs胞内胆固醇蓄积;ox-LDL上调lncRNA RP11-463O9.5表达而抑制小凹蛋白-1表达,可能是诱导血管平滑肌细胞源性泡沫细胞形成的分子机制之一。
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