【摘 要】
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目的:本研究旨在探究肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2（Tumor necrosis factor-α-induced protein-8-like2,TIPE2）基因修饰人羊膜间充质干细胞（Human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）对同系小鼠心脏移植缺血再灌注炎症损伤的作用影响及潜在机制,并求证TIPE2基因修饰的h AMSCs较h AMSCs具有更良
【基金项目】
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国家自然科学基金（81660074）；
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目的:本研究旨在探究肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2（Tumor necrosis factor-α-induced protein-8-like2,TIPE2）基因修饰人羊膜间充质干细胞（Human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）对同系小鼠心脏移植缺血再灌注炎症损伤的作用影响及潜在机制,并求证TIPE2基因修饰的h AMSCs较h AMSCs具有更良好的炎症抑制作用。为TIPE2基因修饰的h AMSCs在心脏移植领域的进一步研究应用提供研究经验,也为h AMSCs基因修饰研究应用于心脏移植研究领域带来新的思路。方法:1.体内实验:建立同系小鼠颈部心脏移植心肌缺血再灌注损伤实验模型,实验分组为对照组（单纯心脏移植组）、h AMSCs组、TIPE2-h AMSCs组,建模术毕分别经尾静脉向各组注射同体积磷酸缓冲盐溶液（PBS）溶液、5×10~5个/0.2m L h AMSCs、5×10~5个/0.2m L TIPE2-h AMSCs,注射后24小时取材,苏木精-伊红染色（HE）染色观察供心右心室心肌病理改变,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测外周血中白介素-8（IL-8）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;免疫组化法测定心肌组织中IL-8、IL-10、TNF-α水平,蛋白质免疫印迹（WB）检测心肌细胞p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）表达水平。2.体外实验:建立同系小鼠颈部心脏移植心肌缺血再灌注损伤实验模型,采集受体外周血,Ficoll密度梯度离心法分离提取外周血单个核细胞（PBMC）,实验分组为对照组（植物凝集素（PHA）+PBMC组）、h AMSCs+PHA+PBMC共培养组、TIPE2-h AMSCs+PHA+PBMC共培养组,24小时后观察PBMC增殖情况,ELISA检测IL-10、TNF-α水平。结果:1.体内实验:（1）右心室心肌病理:对照组心肌细胞呈现水肿状态,肌肉间隙可见淋巴细胞及红细胞渗出,局部可见单核细胞;h AMSCs组部分心肌细胞呈现轻度水肿,肌肉间隙可见少量淋巴细胞及红细胞渗出,局部可见单核细胞及中性粒细胞;TIPE2-h AMSCs组右心室部分心肌细胞呈现轻度水肿,肌肉间隙可见散在淋巴细胞及少量红细胞渗出。（2）心肌组织免疫组化以及外周血ELISA:相比对照组,h AMSCs组以及TIPE2-h AMSCs组均下调IL-8、TNF-α水平,促进IL-10水平,并且TIPE2-h AMSCs组作用优于h AMSCs组。（3）WB检测心肌组织p38蛋白:h AMSCs移植组、TIPE2-h AMSCs组p38蛋白表达均下降。2.体外实验:（1）流式细胞仪检测:经PHA刺激后,PBMC出现明显活化增殖,相比对照组,h AMSCs、TIPE2-h AMSCs均抑制PBMC细胞增殖,并且TIPE2-h AMSCs增殖抑制作用优于h AMSCs。（2）ELISA检测:h AMSCs、TIPE2-h AMSCs均下调TNF-α水平,促进IL-10水平,并且TIPE2-h AMSCs作用优于h AMSCs。结论:1.心肌组织病理、免疫组化及炎症因子（IL-8、TNF-α、IL-10）检测结果表明,h AMSCs具有减轻心肌损伤,降低IL-8、TNF-α促炎因子及促进IL-10抗炎因子水平作用,且TIPE2基因修饰的h AMSCs较h AMSCs具有更好的调控作用。2.TIPE2基因修饰的h AMSCs较h AMSCs对于PBMC体外增殖具有更好的抑制作用。3.h AMSCs及TIPE2修饰h AMSCs对于同系小鼠心脏移植缺血再灌注损伤的抑制作用可能同p38蛋白表达水平存在潜在关联。
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