【摘 要】
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目的：肺纤维化过程中，在转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor beta，TGF-β1）刺激下，成纤维细胞转变为成肌纤维细胞的重要标志是α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达。为研究血清应答因子（serum response factor，SRF）在α-SMA表达调节机制中的作用，本实验利用基因沉默的方法，观察目的基因S
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目的：肺纤维化过程中，在转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor beta，TGF-β1）刺激下，成纤维细胞转变为成肌纤维细胞的重要标志是α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达。
为研究血清应答因子（serum response factor，SRF）在α-SMA表达调节机制中的作用，本实验利用基因沉默的方法，观察目的基因SRF沉默后，对TGF-β1作用下的人肺成纤维细胞增值及α-SMA表达的影响，从而探讨SRF在人肺成纤维细胞表形转化过程中的作用。
方法：
构建分别含有SRF1、SRF2、SRF3干扰序列的三种质粒表达载体，转染人肺成纤维细胞（MRC-5），通过定量PCR及Western-blot方法检测目的基因SRFmRNA及其蛋白的表达，筛选出最佳干扰序列SRF3；将SRF3重组质粒转染MRC-5后，给予TGF-β1刺激，在特定时间点和一定时间内分别用MTT法和Western-blot方法测定细胞增殖抑制率和细胞内α-SMA的表达。
结果：
与非特异Genesil-siRNA阴性对照质粒转染的MRC-5细胞或未转染质粒的MRC-5细胞相比，SRF3-siRNA表达质粒转染的MRC-5细胞SRF的mRNA量及蛋白表达量均明显降低；TGF-β1干扰后MRC-5细胞的增殖亦受到明显抑制；TGF-β1刺激24 h后，细胞内α-平滑肌肌动蛋白表达量明显下降。
结论：
1.在TGF-β1作用下，血清应答因子（SRF）表达的下调可以抑制人肺成纤维细胞的增殖。2.血清应答因子（SRF）的表达下调，可以减少TGF-β1作用下，人肺成纤维细胞内α-平滑肌肌动蛋白的表达。
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