拥有“高原之舟”美誉的牦牛是当地牧民重要的经济来源。但与平原的牛属动物相比,牦牛的性成熟能力较差,生殖能力也较低,因此通过胚胎工程技术改善牦牛生殖能力具有重要的意义。卵母细胞的体外培养技术是胚胎工程的基础环节,但是由于牦牛卵母细胞体外成熟率较低,胚胎发育能力较差,这将制约牦牛胚胎工程技术的发展。因此提高牦牛卵母细胞的体外成熟,对进一步完善牦牛卵母细胞胚胎工程技术的应用具有重要的意义。维生素A能够促进小鼠、猪、牛、羊等动物卵母细胞的减数分裂,进一步促进卵母细胞的成熟。但现未有文献报道维生素A对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。因此本实验以牦牛的卵母细胞作为研究对象,通过添加四种不同浓度（2、5、10、20μM）的维生素A,检测其对牦牛卵母细胞成熟及发育能力的影响,同时对其潜在的信号通路节点基因进行验证,确定其潜在的作用信号通路,为进一步提高牦牛卵母细胞体外成熟提供参考资料。实验结果如下:1.通过观察在不同维生素A浓度组（0、2、5、10、20μM）中的牦牛卵丘卵母细胞复合物（Cumulus-oocyte complexes,COCs）中第一极体的排出情况,统计卵母细胞的成熟率。结果显示,对照组0浓度的成熟率为63.60%,2、5、10μM三个浓度与对照组相比差异显著（85.77%、71.68%、71.44%）（p＜0.05）,且在维生素A的浓度为2μM时,卵母细胞的成熟率是最高的,与其他组相比差异显著（p＜0.05）,同时,20μM浓度的成熟率为57.20%,与其他组之间相比成熟率最低且差异显著（p＜0.05）。2.对各组含有不同浓度维生素A的成熟牦牛卵母细胞进行进一步的孤雌激活,统计其卵裂率。结果显示,对照组卵裂率为52.03%,2、5、10μM三个浓度与对照组相比差异显著（76.80%、64.85%、61.22%）（p＜0.05）,且在维生素A的浓度为2μM时,卵母细胞的卵裂率达到最高,与各组相比差异显著（p＜0.05）,同时,20μM浓度的卵裂率为36.54%,与其他组相比卵裂率最低且差异显著（p＜0.05）;对照组的囊胚率为24.79%,2、5、10μM三个浓度的囊胚率分别为65.61%、40.63%、33.96%,与对照组相比囊胚率均有显著提升（p＜0.05）且在2μM时囊胚率达到最高,进一步验证了2μM的维生素A对牦牛卵母细胞的成熟有促进作用。3.通过RT-q PCR技术检测不同浓度维生素A对牦牛卵母细胞成熟相关基因表达的影响。通过选取已有文献报道的维生素A调控卵母细胞典型信号通路中的节点基因RXRA、RXRB、RXRG、RARA、RARB、RARG、STRA8,以及在非典型信号通路中的节点基因MEK、ERK1/2进行检测。结果发现在不同浓度维生素A中,RARA、RXRA、STRA8三个基因均有所表达其余基因未见表达,证明维生素A主要是通过典型的信号通路对牦牛卵母细胞产生影响。同时在2μM浓度时基因RARA、RXRA、STRA8与对照组相比表达显著,进一步验证了添加2μM的维生素A对牦牛卵母细胞的成熟有促进作用。在此基础上,检测在2μM浓度维生素A浓度中RARA、RXRA、STRA8基因在牦牛卵母细胞GV、MI、MII、孤雌激活时期的动态表达情况。结果表明这三个基因的表达量从GV期开始逐渐升高,在MII期时达到顶峰,与对照组相比差异显著。其中STRA8基因的表达量最高,进一步从分子层面上证明了维生素A对牦牛卵母细胞的成熟有促进作用。综上所述,本研究优化了牦牛卵母细胞体外培养体系中维生素A的培养浓度,首次发现在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,添加2μM浓度的维生素A可以促进牦牛卵母细胞的成熟,能够显著提高后期孤雌激活的卵裂率,同时验证了维生素A主要通过维生素A典型信号通路调控牦牛卵母细胞的成熟。