【摘 要】
：
兔出血症病毒二型（RHDV2）,2020年首次在中国分离,可感染不同日龄家兔,尤以对幼龄兔表现出较高的病死率。。临床上以精神沉郁、厌食、严重低温、呼吸困难、反应迟钝、心动过缓、心律失常,病兔口鼻流出泡沫状红色血液,且肛门松弛伴黄色稀粪为主要特征。本研究立足于对山东某兔场出现疑似RHDV2病例进行实验,通过系列研究,鉴定为RHDV2,并进行全基因组序列的扩增分析和初步的致病性实验,取得成果如下:1.
论文部分内容阅读
兔出血症病毒二型（RHDV2）,2020年首次在中国分离,可感染不同日龄家兔,尤以对幼龄兔表现出较高的病死率。。临床上以精神沉郁、厌食、严重低温、呼吸困难、反应迟钝、心动过缓、心律失常,病兔口鼻流出泡沫状红色血液,且肛门松弛伴黄色稀粪为主要特征。本研究立足于对山东某兔场出现疑似RHDV2病例进行实验,通过系列研究,鉴定为RHDV2,并进行全基因组序列的扩增分析和初步的致病性实验,取得成果如下:1.临床病料中RHDV2的鉴定为了鉴定该养殖场兔子死亡的病原,首先将肝脏悬液进行了血凝检测,结果显示其具有血凝特性。随后运用RHDV的分型引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳观察到在对应RHDV2的480bp处出现特异性目的条带,而对应RHDV1的193bp处则无扩增条带。经序列比对分析证实病料中扩增获得的目的片段为RHDV2的VP60部分序列,与国内的RHDV2毒株高度同源。将该病料中鉴定的RHDV2毒株命名为SD-2021。另外使用兔巴氏杆菌鉴定引物进行PCR扩增,未扩增出特异条带。2.SD-2021毒株的全基因序列的扩增与分析为了解该毒株的基因组信息,本研究根据四川RHDV2毒株SC2020/0401（MT586027）序列设计了8对全序扩增引物,分片段对SD-2021进行扩增。扩增结果显示,从肝脏中扩的8个片断的大小同预期的片段大小一致。使用DNAStar拼接获得基因全长序列7443bp,随后利用MEGA11进行系统进化树和同源性分析。发现SD-2021与四川SC2020/0401（MT586027）、CHN/SC2020（MT434995）全基因组同源性为88.03%,VP60核苷酸同源性为98.91%,非结构核苷酸同源性84.46%;系统进化树分析发现,分离的SD-2021毒株在RHDV2和经典RHD中形成独立的一个分支,针对和四川毒株全基因组同源性较低的情况下,用RDP和Simpolt软件进行重组分析,确认SD-2021发生了重组事件,重组断点在5266bp处,其主要亲本株为RHDV1/Triptis（EF558583）,次要亲本RHDV2/SC2020/0401（MT586027）。3.SD-2021毒株的致病性研究将肝脏组织悬液皮下注射30日龄家兔进行攻毒,攻毒后出现典型的口鼻出血,浑身抽搐,角弓反张等临床症状,剖检发现肝脏、肺脏、心脏均有出血,脾脏边缘肿大等现象。病理切片在20倍视野下可以观察到肝脏组织结构紊乱,中央的静脉、汇管区域和肝实质内有明显的肝细胞呈弥散性坏死。对其病死兔的心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、气管、粪便进行荧光定量,发现其病毒含量最高部位在肝脏组织,其余脏器均含有病毒,其粪便有的能检测出,有的检测不出。肝脏研磨后梯度稀释为10-3、10-4、10-5、10-6对30日龄的兔子进行半数致死量测定,结果为104.6～104.8。用同样的方法对30、40、60日龄的兔子进行攻毒时发现,日龄小的兔子对该病毒更敏感。综上所述,本研究首次发现中国境内出现RHDV2的重组毒株,表明RHDV2在不断的变异,具有遗传多样性。并且对其重组毒株进行了体内复制试验,证实了其对家兔的毒力,为RHDV2的临床防控提供了数据支持。
其他文献
犬星状病毒（Canine astrovirus,CAst V）能引起犬呕吐、腹泻、发热等症状,对犬的健康造成威胁,其主要感染幼犬,在世界各个国家不同地区皆有流行,分布广泛。目前针对CAstV的检测方法有:电子显微镜技术、半巢式RT-PCR方法、荧光定量RT-PCR方法、巢式RT-PCR方法、下一代测序技术、RT-PCR技术等。本研究的目的是建立针对CAst V的荧光定量RT-PCR检测方法,为CA
四川是猪链球菌（Streptococcus suis）的历史主疫区,此地区2005年曾有过该细菌较大范围感染人的报道,猪链球菌也是近年来危害本地区养猪业发展的主要病原菌。为调查本地区猪链球菌流行血清型、探究本地区猪链球菌的耐药性及优势毒力基因型,我们对2021-2022年四川部分地区养殖场死亡育肥猪的肺部组织进行猪链球菌的分离鉴定和主要生物学特性的研究。研究结果如下:通过采集本地区2021至202
肝脏作为机体消化系统重要的代谢器官,具有转化、排泄等生物学功能,对各种感染性和非感染性因素敏感而容易受到损伤。化学性肝损伤是最常见的类型之一,容易引起肝纤维化或不可逆转的肝硬化而导致肝癌。相关研究也表明化学性肝损伤与活性氧自由基及其引起的炎症反应有关。祖国传统医学,有许多药用植物被用于慢性病的补充和替代治疗,大量植物提取物含有多种具有生物活性的化学物质如保肝活性。在本研究中,我们在对17种植物药物
沙门菌病是一种重要的人畜共患病,给动物和人类健康带来巨大的危害。沙门菌在养殖场中广泛存在,尤其禽养殖场;在禽上,沙门菌不仅能水平传播,而且通过卵垂直传播,严重影响养禽业的发展。沙门菌也是主要的食源性致病菌,人类因食用感染的禽蛋、禽肉制品等导致食物中毒,沙门菌在细菌性食物中毒中占首位。近年来,国内外主要采用抗菌药物防治禽沙门菌病,然而,由于抗菌药物的滥用,其耐药性逐年增强,耐药谱也越来越广,给沙门菌
横梗霉菌是一种广泛存在于环境中的条件性致病菌,当宿主免疫功能低下时容易侵入,从而对机体造成广泛性的感染。为了深入研究横梗霉菌的致病机制,本试验采用真菌培养、扫描电镜、PCR扩增、毒力因子检测、药敏试验、小鼠感染试验、过碘酸雪夫（PAS）和六铵银（GMS）染色、苏木精-伊红（HE）染色和透射电镜等方法进行研究。结果显示,从羊的皮肤中分离到菌株LYSF001,观察培养的菌丝呈白色,质地呈绒毛状;镜检观
牛A群轮状病毒（Group A Bovine Rotavirus,BRVA）是引起犊牛腹泻疾病的重要病原之一。近年来,由BRVA引起的犊牦牛腹泻疾病给牦牛养殖业带来了极大的经济损失,大量研究表明BRVA具备跨物种间传播到人或其他动物的能力,具有重要的公共卫生学意义。牦牛是青藏高原及毗邻地区特有的畜种资源,BRVA也可引起牦牛腹泻,但有关牦牛源BRVA的流行病学调查和基因组研究资料较少。本研究对川西
大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）是人和动物肠道的正常菌群,在自然界广泛存在。当机体应激或免疫力下降时,可导致人和动物发病,给人类健康、畜牧业发展以及野生动物保护带来一定的危害。大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）作为国家一级保护动物,是世界公认的易危野生动物。而大肠杆菌引起的肠道疾病是危害大熊猫健康的重要原因之一。大熊猫源大肠杆菌的研究主要集中在血清型和
为了解成都市宠物生活环境中大肠埃希菌与肠球菌的耐药情况,以市区15家宠物相关场所为采集点,从空气、物体表面获取样本,并进行大肠埃希菌、肠球菌的分离培养和鉴定,同时根据样本来源进行归类分析,明确不同环境因素与目标菌株分离率及耐药性的关系。另外,根据受试菌株的耐药表型,对多重耐药菌株进行β-内酰胺类、四环素类、喹诺酮类部分耐药基因的检测,并结合环境因素进行相关性分析。结果报道如下:1.从8家宠物医院、
拥有“高原之舟”美誉的牦牛是当地牧民重要的经济来源。但与平原的牛属动物相比,牦牛的性成熟能力较差,生殖能力也较低,因此通过胚胎工程技术改善牦牛生殖能力具有重要的意义。卵母细胞的体外培养技术是胚胎工程的基础环节,但是由于牦牛卵母细胞体外成熟率较低,胚胎发育能力较差,这将制约牦牛胚胎工程技术的发展。因此提高牦牛卵母细胞的体外成熟,对进一步完善牦牛卵母细胞胚胎工程技术的应用具有重要的意义。维生素A能够促
猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）已在世界范围内流行数十年之久,至今未得到有效控制。究其原因为其病原猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）除临床传染性较强外,基因组还具有突变快、重组频繁的特点。自199