【摘 要】
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【目的】探讨烟酰胺单核苷酸（NMN）改善PCOS大鼠子宫内膜组织稳态的作用。【方法】将45只雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组（CON组）15只和模型组（PCOS组）30只。CON组大鼠进行普通饲料喂养,PCOS组大鼠用来曲唑连续灌胃30天,同时进行高脂饲料喂养,建立PCOS大鼠模型。PCOS模型构建成功后,将大鼠随机分为模型组（PCOS组）15只和NMN干预组（实验组）15只。N
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【目的】探讨烟酰胺单核苷酸（NMN）改善PCOS大鼠子宫内膜组织稳态的作用。【方法】将45只雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组（CON组）15只和模型组（PCOS组）30只。CON组大鼠进行普通饲料喂养,PCOS组大鼠用来曲唑连续灌胃30天,同时进行高脂饲料喂养,建立PCOS大鼠模型。PCOS模型构建成功后,将大鼠随机分为模型组（PCOS组）15只和NMN干预组（实验组）15只。NMN干预21天,期间连续检测大鼠体重和动情周期变化,NMN干预结束后检测生殖相关血清激素水平、子宫大体形态、重量以及病理学变化;随后通过合笼实验检测各组大鼠的生育力。通过Western blotting、q PCR和免疫组化实验技术分析凋亡相关因子BCL-2、BAX和CASPASE3的表达,分析NMN对PCOS大鼠子宫内膜组织稳态的影响。随后采用Western blotting、q PCR以及免疫组化实验技术分析胰岛素抵抗介导的PI3K/AKT信号通路IGF1、IGF1R、PI3K、AKT、p-AKT和糖酵解关键酶LDHA、PKM2、HK2等相关因子的表达规律,以评估NMN对PCOS大鼠子宫中胰岛素信号通路和糖酵解通路的相关指标的调控作用。【结果】1.与CON组相比,PCOS组大鼠体重、生殖相关血清激素水平特别是睾酮、胰岛素水平明显升高;NMN干预后PCOS大鼠体重、生殖相关血清激素水平特别是睾酮、胰岛素水平明显降低。2.与CON组相比,PCOS组大鼠动情周期紊乱,多处于动情后期或间期、子宫重量减少,NMN干预后可逐渐恢复PCOS大鼠的动情周期、增加子宫重量,且趋于对照组。子宫大体形态和HE染色的结果显示,PCOS大鼠子宫明显变细,腺体数量明显减少,子宫内膜厚度明显减小;NMN干预后子宫形态接近对照组,且腺体和子宫内膜厚度明显增加。3.合笼实验结果显示,与对照组相比,PCOS大鼠产仔数明显减少,而NMN干预后产仔数明显上升,与对照组相近。4.q PCR和Western blotting实验结果显示,与CON组相比,PCOS大鼠凋亡相关蛋白BCL-2的表达明显下降,而BAX和CASPASE3的表达明显上升,NMN干预后BCL-2、BAX和CASPASE3的表达明显逆转,趋于CON组;免疫组化实验结果显示,与对照组相比,PCOS大鼠子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞中凋亡相关蛋白BCL-2的阳性信号减弱,BAX和CASPASE3的阳性信号增强,给予NMN干预后BCL-2、BAX和CASPASE3的阳性信号强弱明显改善。5.q PCR和Western blotting实验结果显示,与CON组相比,胰岛素抵抗介导的PI3K/AKT信号通路相关指标IGF1的表达明显增高,而IGF1R、PI3K、AKT、p-AKT的表达则明显下降,给予NMN干预后IGF1的表达明显降低,IGF1R、PI3K、AKT、pAKT的表达则明显增高;免疫组化结果显示,与CON组相比,PCOS大鼠子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞中IGF1的阳性信号增强,而IGF1R和AKT的阳性信号减弱,给予NMN干预后,与CON组相比,PCOS大鼠子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞中IGF1的阳性信号减弱,而IGF1R和AKT的阳性信号增强。6.q PCR和Western blotting分析胰岛素抵抗环境下PCOS大鼠糖酵解关键限速酶的表达,结果显示PCOS大鼠子宫组织中HK2、PKM2和LDHA明显下调,NMN干预后可显著上调其表达;免疫组化结果提示,与CON组相比,PCOS大鼠子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞中糖酵解关键酶基因HK2、PKM2、LDHA的阳性信号减弱,NMN干预后HK2、PKM2、LDHA的阳性信号增强。【结论】NMN可明显改善PCOS大鼠子宫内膜组织稳态,可能与抑制子宫胰岛素抵抗和调控糖酵解通路有关。
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