【摘 要】
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马疱疹病毒（Equid herpesvirus,EHV）主要引起马属动物的鼻肺炎、脑脊髓炎和流产等疾病,严重时可导致死亡,给马属动物生产造成了严重的经济损失。随着驴产业的兴起,驴养殖逐渐向集约化、规模化发展,但是驴呼吸系统疾病严重制约了产业的健康发展。已经从我国规模驴场驴群中分离到EHV-8,但EHV-8等马疱疹病毒在驴群中的流行情况及其致病机理需要进一步深入研究。1.山东部分地区规模化驴场马疱疹
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马疱疹病毒（Equid herpesvirus,EHV）主要引起马属动物的鼻肺炎、脑脊髓炎和流产等疾病,严重时可导致死亡,给马属动物生产造成了严重的经济损失。随着驴产业的兴起,驴养殖逐渐向集约化、规模化发展,但是驴呼吸系统疾病严重制约了产业的健康发展。已经从我国规模驴场驴群中分离到EHV-8,但EHV-8等马疱疹病毒在驴群中的流行情况及其致病机理需要进一步深入研究。1.山东部分地区规模化驴场马疱疹病毒分子流行病学调查为研究山东地区EHV流行情况,从山东地区76个规模驴场采集鼻拭子1834份,PCR检测鼻拭子中EHV-1、EHV-4和EHV-8病原。结果显示,在鼻拭子样品中EHV-1和EHV-4病原均未测出;EHV-8病原场感染率为76.32%（58/76）,个体感染率为6.65%（122/1834）。EHV-8分离株与EHV-8 Wh株同源性最高,为99.7%。统计学分析显示,不同地区间驴的EHV-8感染率差异显著（p＜0.05）,以德州地区最高,为13.36%（29/217）;不同年龄间驴的EHV-8感染率差异不显著（p＞0.05）;在冬季驴的EHV-8感染率最高（p＜0.05）,为14.57%（73/501）。本研究首次对山东地区规模驴场EHV的流行进行了系统调查,为预警EHV的流行风险提供了重要参考。2.EHV-8病毒的分离鉴定从驴鼻拭子中分离到EHV-8病毒LCDC01株（Genbank:PRJNA787358）。EHV-8分离株接种RK-13细胞和BHK-21细胞后能形成典型细胞病变,TCID50为1×10-3.75/100μL。经鼻腔接种小鼠后体重下降,并且观察到肺泡壁增厚和局部出血;经腹腔接种小鼠无明显临床和组织病理学变化。这表明分离株病毒符合EHV一般特征,但病毒感染力较弱。本研究成功分离到EHV-8规模驴场流行株,为后续EHV-8研究奠定了基础。3.EHV-8 gD基因原核表达及间接ELISA方法的建立为建立EHV-8间接ELISA检测方法,本研究构建EHV-8 gD基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21菌株中表达。经包涵体纯化后,得到特异性良好的重组蛋白。纯化后建立间接ELISA检测方法,结合商品化试剂盒对聊城周边地区进行血清学流行病学初步调查,结果显示,EHV的个体抗体阳性率为27.74%,场阳性率为73.68%;经统计分析,不同地区间的抗体阳性率差异不显著（p＞0.05）。本研究初步建立EHV-8快速诊断方法,为研发更加特异、灵敏的ELISA方法提供了参考。4.EHV-8 gD蛋白多克隆抗体的制备为制备EHV-8 gD蛋白多克隆抗体,本实验以纯化的p ET-32a-gD960重组蛋白为抗原,免疫小鼠后收集高免血清,结果显示,p ET-32a-gD960重组蛋白多克隆抗体效价为1.6×10~4,且特异性良好;通过动物攻毒保护实验证明了重组蛋白多克隆抗体对EHV-8病毒感染能起到一定的保护性。本研究为EHV-8疫苗研发提供了思路,证明了EHV-8 gD蛋白作为疫苗候选抗原的可能性。
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