【摘 要】
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目的:探讨氯化血红素对人白血病细胞株K562、CEM-C1的增殖、凋亡作用、自噬及其对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达的影响,进而研究氯化血红素对白血病的作用机制。材料与方法:以人白血病细胞株K562、CEM-C1为研究对象,培养细胞,绘制生长曲线,取对数期的细胞以不同浓度的氯化血红素不同时间内作用于K562、CEM-C1细胞株,观察细胞形态,确定最适宜的氯化血红素浓度用于后续实验。最终
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目的:探讨氯化血红素对人白血病细胞株K562、CEM-C1的增殖、凋亡作用、自噬及其对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达的影响,进而研究氯化血红素对白血病的作用机制。材料与方法:以人白血病细胞株K562、CEM-C1为研究对象,培养细胞,绘制生长曲线,取对数期的细胞以不同浓度的氯化血红素不同时间内作用于K562、CEM-C1细胞株,观察细胞形态,确定最适宜的氯化血红素浓度用于后续实验。最终确定0μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度的氯化血红素分别作用于K562、CEM-C1细胞6h、24h、48h,CCK-8法测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot法测氯化血红素对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白及自噬相关蛋白的影响。结果:1.K562、CEM-C1细胞株系悬浮细胞,呈圆形,胞体直径约15-20μm,对数生长期细胞密集分布,经氯化血红素处理后细胞出现棘样改变,可见较多伪足,核染色加深。2.24小时内,氯化血红素以浓度依赖性对K562、CEM-C1细胞系具有增殖抑制作用;48小时未见明显的依赖性。氯化血红素对CEM-C1细胞24h以内,随着时间延长细胞增殖抑制率呈上升趋势,在6h及24h药物浓度在10-25μmol/L之间,细胞增殖抑制率逐渐增加,在25-50μmol/L之间,细胞增殖抑制率较前有所降低。表明氯化血红素对CEM-C1细胞的增殖抑制作用仅在24h内且浓度在10-25μmol/L间呈时间、浓度依赖性。3.以0μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L氯化血红素培养K562、CEM-C1细胞24h,K562细胞凋亡率分别为:1.25±0.01、1.883±0.01572、5.89±0.12288、8.9933±0.43924;CEM-C1细胞凋亡率分别为:0.2743±0.01721、0.9433±0.02887、0.975±0.03148、2.49±0.07;在24h以内,在0μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50umol/L的浓度时,随着药物作用浓度及作用时间延长,凋亡率越高。4.Western blot结果表明,氯化血红素可以下调Bcl-2、P27、SKP2蛋白表达,呈浓度剂量依赖性。与未加药的对照组相比,氯化血红素药物组（10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L）Bcl-2、P27、SKP2蛋白表达量明显下降,随药物浓度增加蛋白表达量下降;表明氯化血红素可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导K562、CEM-C1细胞凋亡。5.氯化血红素可诱导K562、CEM-C1细胞发生自噬。Western blot结果显示,与未加药的对照组相比,氯化血红素药物组（10μmol/L、25μmol/L、50umol/L）LC3、P62、Beclin1蛋白表达量明显上升,随浓度增加蛋白表达量上升。结论:氯化血红素能够抑制K562、CEM-C1细胞增殖并诱导其凋亡,通过影响PI3K/AKt/mTOR信号通路使K562、CEM-C1细胞产生自噬,因此,氯化血红素有望成为治疗白血病的药物。
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