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摘要：目的 建立复方血栓通胶囊中8种有效成分（三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、丹参酮Ⅰ、哈巴俄苷、黄芪甲苷）在大鼠血浆中的液相色谱-质谱/质谱定量测定方法。方法 色谱柱：Thermo Hypersil GOLD（2.1 mm×100 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：A为1%甲酸，B为乙腈；梯度洗脱：0～10 min 25%～55%B，10～20 min 55%～70%B；流速：0.2 mL/min；进样量：10 μL。离子源：ESI源，正离子模式，SRM扫描。结果 以盐酸巴马汀为内标，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、哈巴俄苷、黄芪甲苷、丹参酮Ⅰ的检测范围分别为1.00～800 ng/mL、0.950～760 ng/mL、1.44～1440 ng/mL、1.33～1330 ng/mL、9.90～990 ng/mL、1.01～1010 ng/mL、1.16～928 ng/mL、10.0～800 ng/mL。准确度分别在85%～115%之间，绝对回收率达到50%～70%，日内精密度与日间精密度RSD≤15%。结论 该方法快速、灵敏、重复性好，可用于复方血栓通胶囊8种有效成分在大鼠体内的相关药代动力学研究。
关键词：复方血栓通；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；液相色谱-质谱/质谱
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.06.028
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）06-0089-06
Abstract：Objective To establish a sensitive and specific LC-MS/MS method for measurement of notoginsenoside R1， ginsenoside Rg1， ginsenoside Re， ginsenoside Rb1， ginsenoside Rd， tanshinone Ⅰ， astragaloside Ⅳ and harpagosidein of Fufang Xueshuantong Capsule in rat plasma. Methods The HPLC separation was performed on Thermo Hypersil GOLD column （2.1 mm×100mm， 5 μm） at 30 ℃， injecting 10 μL and using acetonitrile-water （0.1% formic acid） as the mobile phrase （B was acetonitrile， A was 0.1% formic acid；0-10 min， 25%-55%B；10-20 min， 55%-70% B） with the flow rate of 0.2 mL/min. Detection was performed on a tandem quadrapole mass spectrometer using positive electrospray ionization， SRM scan mode. Results The eight compounds showed good linearity in wide ranges （notoginsenoside R1 1.00-800 ng/mL， ginsenoside Rg1 0.950-760 ng/mL， ginsenoside Re 1.44-1440 ng/mL， ginsenoside Rb1 1.33-1330 ng/mL， ginsenoside Rd 9.90-990 ng/mL， harpagosidein 1.01-1010 ng/mL， astragaloside Ⅳ 1.16-928 ng/mL， tanshinone Ⅰ 10.0-800 ng/mL）. In addition， the accuracy and recovery were around 85%-115% and 50%-70%. The RSD of intra and inter day precision were lower than 15%. Conclusion The method is specific， rapid and sensitive. Therefore， it can be applied to pharmacokinetic study of eight effective compounds in Fufang Xueshuantong Capsule.
Key words：Fufang Xueshuantong Capsule；notoginsenoside R1；ginsenoside Rg1；ginsenoside Rb1；LC-MS/MS
复方血栓通胶囊是中山大学眼科中心与广东众生药业联合研制的纯中药复方制剂，由三七、丹参、黄芪和玄参4味中药组成。其中三七为君药，丹参为臣药，黄芪与玄参为佐使药。该制剂具有活血化瘀、益气养阴功效及扩张血管、增加血流量、改善血液循环和微循环的药理作用，对于糖尿病视网膜病变等眼科疾病疗效显著[1-2]。
目前，该制剂药理、药效及单味药化学成分相关研究显见[3-8]，但复方的药代动力学研究尚不明了。本课题在前期分析总结复方血栓通胶囊4个单味中药的有效成分、药理作用以及药代动力学研究相关文献的基础上，筛选得到复方血栓通胶囊的8个原型入血成分，分别为三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd[9-13]，丹参中的丹参酮Ⅰ[11-13]，黄芪中的黄芪甲苷和玄参中的哈巴俄苷[14-17]。并采用液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）技术，在验证复方血栓通胶囊羧甲基纤维素钠混悬液大鼠口服灌胃后，选定的8种成分可入血基础上，选取了醛糖还原酶、血管内皮生长因子、色素上皮衍生因子（PEDF）、全血黏度和血糖含量等14项药理学指标，对糖尿病模型大鼠视网膜微血管病变的有效性及作用机制进行了药理学研究，表明所筛选成分是复方血栓通胶囊治疗糖尿病视网膜病变的主要有效成分。因此，我们建立了8个有效成分相应的LC-MS/MS定量方法，用于复方血栓通胶囊的药代动力学研究。 [7] 刘艾林，李铭源，王一涛，等.丹参药理学活性物质基础研究现状[J].中国药学杂志，2009，42（9）：641-644.
[8] 李香华，王洪新.黄芪甲苷在心血管疾病中的作用[J].心血管病学进展，2011，32（1）：132-134.
[9] 茅向军，孙建国，吕天，等.HPLC-MS法测定犬血浆中三七皂苷R1的血药浓度及其药代动力学[J].中国临床药理学与治疗学，2005，10（7）：734-736.
[10] 邓志军，郭洁文，杨敏，等.三七总皂苷及其活性单体药代动力学的研究进展[J].今日药学，2009，19（1）：24-25.
[11] Song M， Zhang SY， Xu XY， et al. Simultaneous determination of three Panax Notoginseng saponins at sub-nanograms by LC-MS/MS in dog plasma for pharmacokinetics of compound Danshen tablets[J]. Journal of Chromatography B，2010，878：3331-3333.
[12] 张丝韵，宋敏，卢俊钢，等.丹参与三七配伍对主要活性成分药代动力学行为的影响[J].药学学报，2010，45（11）：1433-1439.
[13] 游燕，张其云，郑琴，等.丹参和三七多种有效成分在大鼠体内的药代动力学研究[J].中药新药与临床药理，2010，21（6）：614-618.
[14] 王旭慧，朱亮，陈红.黄芪甲苷对正常大鼠离体血管功能的影响[J].中国药理学通报，2006，22（11）：1319-1124.
[15] 陈然，张玉青，王颖，等.黄芪甲甙对大鼠离体肠系膜动脉血管舒缩功能的影响[J].温州医学院学报，2008，38（3）：217-220.
[16] 祝艳斐，毕志明，刘承伟，等.内皮细胞提取和高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用预测玄参中的活性成分[J].中国药科大学学报， 2008，39（3）：228-231.
[17] 张雪梅，王瑞，安睿，等.HPLC同时测定玄参中5种成分的含量[J].中国中药杂志，2011，36（6）：709-711.
（收稿日期：2013-12-23；编辑：陈静）
关键词：复方血栓通；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；液相色谱-质谱/质谱
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.06.028
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）06-0089-06
Abstract：Objective To establish a sensitive and specific LC-MS/MS method for measurement of notoginsenoside R1， ginsenoside Rg1， ginsenoside Re， ginsenoside Rb1， ginsenoside Rd， tanshinone Ⅰ， astragaloside Ⅳ and harpagosidein of Fufang Xueshuantong Capsule in rat plasma. Methods The HPLC separation was performed on Thermo Hypersil GOLD column （2.1 mm×100mm， 5 μm） at 30 ℃， injecting 10 μL and using acetonitrile-water （0.1% formic acid） as the mobile phrase （B was acetonitrile， A was 0.1% formic acid；0-10 min， 25%-55%B；10-20 min， 55%-70% B） with the flow rate of 0.2 mL/min. Detection was performed on a tandem quadrapole mass spectrometer using positive electrospray ionization， SRM scan mode. Results The eight compounds showed good linearity in wide ranges （notoginsenoside R1 1.00-800 ng/mL， ginsenoside Rg1 0.950-760 ng/mL， ginsenoside Re 1.44-1440 ng/mL， ginsenoside Rb1 1.33-1330 ng/mL， ginsenoside Rd 9.90-990 ng/mL， harpagosidein 1.01-1010 ng/mL， astragaloside Ⅳ 1.16-928 ng/mL， tanshinone Ⅰ 10.0-800 ng/mL）. In addition， the accuracy and recovery were around 85%-115% and 50%-70%. The RSD of intra and inter day precision were lower than 15%. Conclusion The method is specific， rapid and sensitive. Therefore， it can be applied to pharmacokinetic study of eight effective compounds in Fufang Xueshuantong Capsule.
Key words：Fufang Xueshuantong Capsule；notoginsenoside R1；ginsenoside Rg1；ginsenoside Rb1；LC-MS/MS
复方血栓通胶囊是中山大学眼科中心与广东众生药业联合研制的纯中药复方制剂，由三七、丹参、黄芪和玄参4味中药组成。其中三七为君药，丹参为臣药，黄芪与玄参为佐使药。该制剂具有活血化瘀、益气养阴功效及扩张血管、增加血流量、改善血液循环和微循环的药理作用，对于糖尿病视网膜病变等眼科疾病疗效显著[1-2]。
目前，该制剂药理、药效及单味药化学成分相关研究显见[3-8]，但复方的药代动力学研究尚不明了。本课题在前期分析总结复方血栓通胶囊4个单味中药的有效成分、药理作用以及药代动力学研究相关文献的基础上，筛选得到复方血栓通胶囊的8个原型入血成分，分别为三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd[9-13]，丹参中的丹参酮Ⅰ[11-13]，黄芪中的黄芪甲苷和玄参中的哈巴俄苷[14-17]。并采用液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）技术，在验证复方血栓通胶囊羧甲基纤维素钠混悬液大鼠口服灌胃后，选定的8种成分可入血基础上，选取了醛糖还原酶、血管内皮生长因子、色素上皮衍生因子（PEDF）、全血黏度和血糖含量等14项药理学指标，对糖尿病模型大鼠视网膜微血管病变的有效性及作用机制进行了药理学研究，表明所筛选成分是复方血栓通胶囊治疗糖尿病视网膜病变的主要有效成分。因此，我们建立了8个有效成分相应的LC-MS/MS定量方法，用于复方血栓通胶囊的药代动力学研究。 [7] 刘艾林，李铭源，王一涛，等.丹参药理学活性物质基础研究现状[J].中国药学杂志，2009，42（9）：641-644.
[8] 李香华，王洪新.黄芪甲苷在心血管疾病中的作用[J].心血管病学进展，2011，32（1）：132-134.
[9] 茅向军，孙建国，吕天，等.HPLC-MS法测定犬血浆中三七皂苷R1的血药浓度及其药代动力学[J].中国临床药理学与治疗学，2005，10（7）：734-736.
[10] 邓志军，郭洁文，杨敏，等.三七总皂苷及其活性单体药代动力学的研究进展[J].今日药学，2009，19（1）：24-25.
[11] Song M， Zhang SY， Xu XY， et al. Simultaneous determination of three Panax Notoginseng saponins at sub-nanograms by LC-MS/MS in dog plasma for pharmacokinetics of compound Danshen tablets[J]. Journal of Chromatography B，2010，878：3331-3333.
[12] 张丝韵，宋敏，卢俊钢，等.丹参与三七配伍对主要活性成分药代动力学行为的影响[J].药学学报，2010，45（11）：1433-1439.
[13] 游燕，张其云，郑琴，等.丹参和三七多种有效成分在大鼠体内的药代动力学研究[J].中药新药与临床药理，2010，21（6）：614-618.
[14] 王旭慧，朱亮，陈红.黄芪甲苷对正常大鼠离体血管功能的影响[J].中国药理学通报，2006，22（11）：1319-1124.
[15] 陈然，张玉青，王颖，等.黄芪甲甙对大鼠离体肠系膜动脉血管舒缩功能的影响[J].温州医学院学报，2008，38（3）：217-220.
[16] 祝艳斐，毕志明，刘承伟，等.内皮细胞提取和高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用预测玄参中的活性成分[J].中国药科大学学报， 2008，39（3）：228-231.
[17] 张雪梅，王瑞，安睿，等.HPLC同时测定玄参中5种成分的含量[J].中国中药杂志，2011，36（6）：709-711.
（收稿日期：2013-12-23；编辑：陈静）