目的建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）大鼠模型,采用“温肾健脾法”代表方四神丸对其进行干预,通过检测结肠组织中TLR2（Toll Like Receptor 2,TLR2）/IRAK4（Interleukin-1 Receptor-Associated Kinase 4,IRAK4）/NF-κB（Nuclear Factor-κB,NF-κB）信号通路关键基因和蛋白,细胞凋亡状况及结肠组织病理形态在干预前后的变化,系统阐释四神丸通过影响TLR2/IRAK4/NF-κB信号通路调控肠道免疫,治疗UC的分子机制,为四神丸的进一步临床运用和转化提供相关实验依据。方法将120只体质量约（200±20）g的SPF级SD大鼠（雌雄各半）在SPF级实验室适应性饲养1w后,随机抽取20只作为空白组,剩余100只采用DNBS/乙醇溶液灌肠建造UC模型,联合氢化可的松皮下注射及番泻叶建立脾肾阳虚证型模型。模型成功后随机分为模型组、阳性药物（美沙拉秦）组、四神丸高、中、低剂量组。阳性药物组按0.36g/kg剂量灌胃,四神丸高、中、低剂量组分别按生药24、12、6 g/kg剂量灌胃,模型组及空白组灌服等体积蒸馏水,灌胃体积均为10 m L/kg。每日观察大鼠饮食量、精神活动状况、毛发、大便性状和便血情况,定期监测大鼠体质量变化。给药21d后,麻醉处死后取结肠组织。观察结肠组织大体形态及损伤情况,HE染色观察结肠组织病理改变,TUNEL染色法检测结肠组织细胞凋亡情况,免疫组化法观察结肠组织TLR2、My D88（Myeloid Differentiation Factor 88,My D88）、IRAK4、NF-κB p65蛋白的表达位置及表达量,WB法检测结肠组织TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65蛋白及NF-κB p65核/浆蛋白的表达量,RT-q PCR法检测结肠组织TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65m RNA的表达量,ELISA法检测结肠组织中IL-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、TNF-α（Tumor Necrosis Factorα,TNF-α）的含量。结果1.造模结果显示,造模后大鼠皮毛逐渐失去光泽且脏污,精神萎靡,反应力差、喜扎堆蜷卧,食欲不振,出现明显脓血便、肛周污浊、腹部皮毛潮湿污秽;大鼠体质量增长缓慢;大鼠DAI评分显著高于空白组（P＜0.01）;CMDI指数显著升高（P＜0.01）。以上表现证实脾肾阳虚型UC模型大鼠模型建立成功。2.苏木精-伊红染色结果显示,空白组肠黏膜层各结构整齐排列,基层的腺体结构规则排列。模型组肠黏膜结构不完整,大量炎性细胞浸润,大量腺体扩张或消失,杯状细胞形态改变。经过治疗后各用药组除四神丸低剂量组外少见炎性细胞浸润,组织结构趋于正常。3.原位末端转移酶标记结果显示,与空白组相比较,模型组结肠组织中凋亡细胞明显增多（P＜0.01）。与模型组相比,结肠组织中凋亡细胞在四神丸高、中剂量组及美沙拉秦组均有不同程度下降（P＜0.01）。4.免疫组织化学法结果显示,TLR2、My D88、IRAK4主要表达于细胞浆、细胞膜,NF-κB p65主要表达于细胞核、细胞浆。与空白组相比,模型组TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65蛋白平均光密度值明显增高（P＜0.01）。与模型组相比,TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65蛋白平均光密度值在四神丸高、中、低剂量组及美沙拉秦组均有不同程度降低（P＜0.01,P＜0.05）。5.蛋白质印迹法结果显示,与空白组比较,模型组TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65总蛋白及NF-κB p65核/浆蛋白表达量显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,四神丸高、中、低剂量组及美沙拉秦组TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65总蛋白及NF-κB p65核/浆蛋白表达量均有不同程度的降低（P＜0.01,P＜0.05）。6.荧光定量聚合反应结果可知,与空白组比较,模型组大鼠TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65 m RNA的表达量明显增高（P＜0.01）;与模型组比较,各用药组TLR2、My D88、IRAK4、NF-κB p65 m RNA的表达量均有不同程度降低（P＜0.01,P＜0.05）。结论1.采用DNBS/乙醇溶液灌肠能成功建立UC大鼠模型,皮下注射氢化可的松配合番泻叶灌胃法能成功建立脾肾阳虚证型大鼠模型。2.温肾健脾法及其代表方四神丸可通过抑制脾肾阳虚型UC模型大鼠TLR2/IRAK4/NF-κB信号通路关键基因和蛋白的表达量,抑制促炎细胞因子的表达,调节肠道免疫,改善肠道黏膜损伤,发挥治疗UC的作用。